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血清常用知识

培养液出现沉淀,但pH值不变 

可能原因

(1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐,将培养基成分沉淀下来

(2)冰冻保存培养液

 

建议解决方法

(1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿,然后灭菌。

(2)将培养液加热到37℃,摇动使其溶解如沉淀仍然存在,丢弃培养液。

血清沉淀比较多

 血清是天然制品,没有经过预老化(反复冻融),放置在2-8℃进行融化时,血清中的蛋白(纤维蛋白等)或脂类有可能凝集析出,出现沉淀或者混浊,这种现象对于多数血清来讲是正常的,并不会影响血清对细胞的促生长作用,更与血清品质无关。此外,热灭活,冷冻的血清直接放到室温或者37℃水浴锅中融化(错误的血清融化方式),37℃培养,反复冻融,融化过程没有摇匀,gamma辐照,长期存放在2-8℃等操作都会增加血清中的沉淀。建议客户将血清放置在-20℃,避免反复冻融,如果一次不能用完一瓶,将冷冻的血清放置在2-8℃至完全融化(期间间断摇晃均匀),无菌操作进行分装,分装后的血清-20℃冷冻保存。

如何处理沉淀比较多的血清

对细胞生长无明显影响,可以不予处理。

如果进行处理,可将融化的血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起使用。不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞的过滤膜,造成血清的浪费和引入不必要的污染。

培养细胞不贴壁

可能原因

(1)胰蛋白酶消化过度

(2)支原体污染    

(3)培养瓶瓶底不干净

(4)培养液pH值过碱(NaHCO3分解)

(5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当

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