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免疫组化操作规程

免疫组化操作规程
一仪器设备
1、18cm不锈钢高压锅和电炉

2、医用微波炉

3、水浴箱;

4、冰箱-18-4

5、湿盒

6、耐高温塑料切片架

7、可调微量移液器

8、定时器

9、pH计

二试剂
1、PBS(磷酸盐缓冲液pH7.27.4)NaCl 137mmol/LKCl 2.7mmol/LNa2HPO4 4.3mmol/LKH2PO4 1.4mmol/L
2、柠檬酸盐缓冲液CBpH6.00.01mol/L1000ml配制柠檬酸三钠 3g柠檬酸 0.4g
3、酶消化液 a0.1%胰蛋白酶液用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制 b0.4%胃蛋白酶液用0.1N的HCl配制

三操作流程
1 、脱蜡和水化
脱蜡前将组织芯片放在60恒温箱中烘烤30分钟
(1)置于二甲苯I中浸泡10分钟在二甲苯II中再浸泡10分钟
(2)无水乙醇I中浸泡5分钟在无水乙醇II中再浸泡5分钟
(3)95%乙醇中浸泡5分钟
(4)85%乙醇中浸泡5分钟
(5)70%乙醇中浸泡5分钟
(6)蒸馏水中浸泡5分钟

2、抗原修复
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片
1、抗原热修复
A  高温高压热修复 取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH6.0于压力锅中大火加热至沸腾将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上放入已沸腾的缓冲液中盖上锅盖扣上压力阀继续加热至喷气从喷气开始计时1-2分钟后压力锅离开热源冷却至室温取出玻片先用蒸馏水洗两次后用PBS洗5分钟
B  微波热修复取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH6.0于微波盒中微波加热至沸腾将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上放入已沸腾的缓冲液中中高档继续处理10-15分钟取出微波盒冷却至室温取出玻片先用蒸馏水洗两次后用PBS洗5分钟
C  酶消化方法常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液胰蛋白酶使用前预热至37切片也预热至37消化时间约为5~30分钟胃蛋白酶消化37时间为10-30分钟

3、化学染色

 
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